产品货号：
GS4965
中文名称：
AP免疫组化试剂盒(兔)
英文名称：
Alkaline Phosphatase IHC Kit(Rabbit IgG)
产品规格：
100T|500T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒用于细胞或组织切片的免疫组织化学染色，适用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片。
AP标记的IgG与组织切片上的一抗结合，再加入BCIP/NBT显色液，在AP的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，在组织切片上形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
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AP标记的IgG与组织切片上的一抗结合，再加入BCIP/NBT显色液，在AP的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，在组织切片上形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
- 由于本试剂盒不再使用生物素，从而可以避免可能由生物素引起的非特异性背景显色，使得显色背景更清晰，阳性结果更特异。
- 本试剂盒操作简便，适用于进行大批量切片免疫组化染色。
| 组分 | 100T | 500T | 保存 |
| 试剂A：内源性碱性磷酸酶阻断剂 | 10mL | 50mL | 2～8℃ |
| 试剂B：封闭液 | 10mL | 50mL | |
| 试剂C：AP标记的山羊抗兔IgG | 50μL | 250μL | -20℃ |
| 试剂D1：20×BCIP溶液 | 0.5mL | 2.5mL | 2～8℃，避光 |
| 试剂D2：20×NBT溶液 | 0.5mL | 2.5mL | |
| 试剂D3：碱性磷酸酶显色缓冲液 | 10mL | 50mL |
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
- 为获得最佳实验结果，请务必优化二抗稀释比例以及BCIP/NBT显色时间。
- 建议在实验过程中设置阳性与阴性对照，以防止假阳性或假阴性的结果。
- 一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度弱时，可提高一抗浓度或延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度或缩短孵育时间，增加洗涤次数或延长洗涤时间。
- 本试剂盒中的NBT对人体有害，操作中应采用合理的防护措施。
- 免疫组织化学染色的准备工作
- BCIP/NBT显色工作液配制
根据显色液用量按以下比例稀释：取900μL碱性磷酸酶显色缓冲液，加20×BCIP溶液()和20×NBT溶液各50μL，混匀，即为BCIP/NBT显色工作液。BCIP/NBT显色工作液须现用现配。 - AP标记的二抗的稀释
将AP标记的二抗按照1:100～1000的比例用TBST进行稀释。根据阳性结果的强弱，其稀释比例可以适当地提高或降低。
- BCIP/NBT显色工作液配制
- 石蜡切片染色
- 切片常规脱蜡至水。
- 对组织进行相应的抗原修复。
- 滴加100μL内源性碱性磷酸酶阻断剂，室温孵育10～15min，以阻断内源性碱性磷酸酶的活性。
- TBST冲洗，5min×3次。
- 滴加100μL封闭液，室温孵育30～45min，倾去，不洗。
- 滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3h或4℃过夜，次日室温孵育1h。
- TBST冲洗，5min×3次。
- 滴加50μL AP标记的二抗稀释液，室温或37℃孵育30～60min。
- TBST冲洗，5min×3次。
- 滴加100μL BCIP/NBT显色工作液，室温显色3～30min，显微镜下观察监测显色情况。蒸馏水冲洗。
- 如果需要，可进行中性红复染。
- 水洗，干燥后水溶性封片剂封片，显微镜观察。
- 切片常规脱蜡至水。
- 血涂片、冰冻切片和细胞切片染色
血涂片、冰冻切片和细胞涂片经固定后，步骤同石蜡切片2～12。
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